样品准备 #
将约0.05g-0.2g玉米苗叶片放入含有钢珠的2.0ml离心管中，放入液氮中冷冻处理（冷冻时间过短会导致后续粉碎不彻底），处理后快速放入破碎仪中，40.0Hz粉碎40s。
叶片样品不易过多和过少，冷冻处理的作用为了便于打碎叶片。
裂解细胞 #
CTAB缓冲液制备 #
2%CTAB缓冲液CTAB缓冲液的配方通常包括CTAB、Tris-HCl、EDTA、NaCl、PVP和 β-巯基乙醇。
20g/L CTAB
CTAB是阳离子去污剂，主要用于破坏细胞膜和核膜，释放细胞核内的DNA。CTAB还可与DNA结合，形成CTAB-DNA复合物，从而在高盐条件下使DNA与其他细胞成分分离。1.4mol/L Nacl
NaCl用于提供高盐环境，有助于CTAB-DNA复合物的形成，并促进蛋白质和多糖等杂质的沉淀，使其从DNA溶液中分离出来。20mmol/L EDTA ph=8
EDTA是一种螯合剂，能够螯合金属离子，尤其是镁离子。镁离子是许多核酸酶（如DNase）的必需辅因子，通过螯合这些金属离子，EDTA可以抑制核酸酶的活性，防止DNA降解。100mmol/L Tris-HCl ph=8
Tris-HCl是一种缓冲剂，用于维持提取缓冲液的pH值，通常在8.0左右。适当的pH值对于维持DNA的稳定性和防止降解是至关重要的。5g/l PVP K-30
PVP是一种能够与多酚类物质结合的聚合物。植物中常含有多酚类物质，这些物质可与DNA结合并干扰下游应用。PVP通过与多酚结合，可以有效去除这些干扰物质。0.1% β-巯基乙醇
β-巯基乙醇是一种还原剂，可以破坏蛋白质中的二硫键，进一步促进蛋白质的变性和沉淀。此外，它还可以减少样品中的氧化应激，保护DNA不受氧化损伤。
加热 #
检查离心管样品的粉碎情况，将完全粉碎的样中立即加入预热至65°含0.1%β-巯基乙醇的CTAB缓冲液800ul，迅速摇晃均匀后置于65°环境中处理1小时。中间过程轻轻颠倒3-4次，确保样品充分裂解。